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Matrigel matrix丨康无敌炸金花宁基质胶利用指南

文章出处:网络整理 人气:发表时间:2021-10-13 12:59

    在体内,基底膜是以细胞为基本的薄层细胞外基质。康宁 Matrigel matrix 是从富含胞外基质卵白的 EHS 小鼠肿瘤中提取的基底膜基质,个中含有约 60%层粘连卵白、30% IV 胶原和 8%的巢卵白。康宁 Matrigel matrix 还含有基底膜聚糖、TGF-ß、表皮发展因子、类胰岛素发展因子、组织纤溶酶原及其他发展因子。



1包被涂层要领:


  康宁基底膜基质可以以几种方法利用。薄层凝胶法合用于在凝胶顶部接种细胞,厚层凝胶法答允您在三位基质内造就细胞,薄层包被法(不凝胶化)给您提供了巨大的卵白质层,您可以在其上造就细胞。您的选择基于您想要实现的最终功效,无论是细胞发展、附着照旧分化。


  留意:在康宁支持网页上宣布了详细的应用措施*。康宁基底膜基质产物的卵白质浓度是批次特异的并提供在阐明证明书上。通过计较需要的特定卵白浓度(mg/mL)得到了稀释康宁基底膜基质产物的一致功效。为了维持凝胶化的一致性,我们推荐不要将康宁基底膜基质稀释到少于 3 mg/mL。请利用酷寒的无血清造就基来稀释康宁基底膜基质。通过在冰上移液管上下吸液或涡旋小瓶来殽杂。


薄层凝胶法

  1. 依照推荐的要领解冻康宁基底膜基质。利用预冷的移液管,将康宁基底膜基质殽杂至匀称。

  2. 将造就板安排在冰上,以 50 µl/cm2向发展外貌插手康宁基底膜基质。

  3. 将造就板安排在 37 °C ,30 分钟。

  4. 假如有须要的话,请在利用无血清造就基轻柔漂洗前吸出未团结的质料。请确保移液器的吸头不要刮擦包被的外貌。造就板此刻可以利用了。


厚层凝胶法

  1.  依照推荐的要领解冻康宁基底膜基质。利用预冷的移液管,将康宁基底膜基质殽杂至匀称。

  2. 将造就板安排在冰上。向康宁基底膜基质中插手细胞并利用预冷的移液管悬浮。以150-200 µl/cm2向发展外貌插手康宁基底膜基质。

  3. 将造就板安排在 37°C,30 分钟。此刻可以添加造就基了。细胞也可以造就在这一凝胶的顶部。


薄层包被法

  1. 依照推荐的要领解冻康宁基底膜基质。利用预冷的移液管,将康宁基底膜基质殽杂至匀称。

  2. 利用无血清造就基将康宁基底膜基质稀释到需要的浓度。对付您的应用措施,您应该完成以履历为主的研究来确定您的最适包被浓度。

  3. 向被包被的容器中插手稀释的康宁基底膜基质。插手的量应该足以容易地包围整个发展外貌。在室温下造就 1 个小时。

  4. 吸出未团结的质料并利用无血清造就基轻柔地漂洗。造就板此刻可以利用了。


细胞苏醒:

  康宁中性卵白酶(货号 354235),康宁细胞苏醒溶液(货号 354253)。利用康宁细胞苏醒溶液在冰上 7 小时内解聚康宁基底膜基质可以或许实现将发展在康宁基底膜基质上的细胞最有效地苏醒,可能利用中性卵白酶,思量到持续造就,中性卵白酶作为一种金属酶可以分手细胞。


2留意事项


  因为康宁基底膜基质在 10°C 以上会开始凝胶化,所以极其重要的是康宁基底膜基质和所有的进入与康宁基底膜基质打仗的造就皿或造就基都应该预冷。产物需要安排于冰上,并在 2ºC-6ºC 的冰箱中可能冷室中留宿融化,卵白浓度高时大概需要更多时间。操纵康宁 Matrigel matrix时,我们发起利用预冷的移液管、吸头和管子。在尝试的全部进程中请保持康宁基底膜基质处于冰上。


3常见问题


  康宁高浓度 Matrigel matrix 用于哪些尝试?

康宁高浓度的 Matrigel matrix matrix 可合用于体内应用研究,如高浓度卵白可促进肿瘤发展。高卵白浓度同时可使康宁 Matrigel matrix 打针入小鼠皮下后保持完整,有利于打针的肿瘤细胞和/或血管生成因子保持原位,便于用于原位阐明和/或今后的切除。


如何将康宁 Matrigel matrix 用于 3D 造就?

奈何建造 3D 胶?

需要将细胞嵌入到康宁 Matrigel matrix 中吗?